通过我们的4titude系列,我们支持从研究到分子诊断的广必威注册网址泛客户应用。betway官网开户app布鲁克斯生命科学继续开发高质量的创新消耗品和仪器,专注于PCR塑料,检测微孔板和密封解决方案。
我们的PCR, qPCR和测序管和板满足了所有灵活性和自动化的需求,成功地致力于最小化试剂的浪费,并最大化效率。
作为PCR范围的补充,我们的检测和存储微孔板支持广泛的应用,包括基于细胞的内容筛选和ELISA,荧光,发光和样品收集。必威注册网址
因为每个板和管都需要一个密封,我们自豪地提供市场上最大范围的密封解决方案,包括粘合剂和热密封,以及自动化和半自动化的微孔板密封仪器。
betway官网开户app布鲁克斯生命科学公司知道开放式对话可以促进创新:当你说话时,我们倾听。由于现货产品并不总是能满足客户的需求,我们完全开放地定制我们的目录范围,以满足您特定的实验室需求。阅读少▲
用于PCR和存储的低结合孔板
聚丙烯(PP)是最好的塑料材料的PCR管,因为它是化学惰性,耐溶剂,并非常适合注射成型-允许生产薄壁管的最佳PCR结果。
尽管这种材料具有非常疏水的性质,但DNA已被证明可以与PP管结合,特别是在高离子强度下。不同的PP聚合物用于生产PCR消耗品,由于它们的特性不同,包括表面电荷,因此它们以不同的数量结合DNA。
DNA与PP表面的结合通常只是反应管和存储容器的问题,而不是PCR/qPCR管。粘附在管壁上的DNA要么在变性过程中被释放出来,要么仍可用于扩增。
然而,由于体积小型化的进展和新技术,如下一代测序(NGS), PCR/qPCR管也越来越被推荐用于其他可能需要超低DNA结合的应用。
- 低结合特性来自于选定的低结合聚合物,不使用涂层来实现结合特性
- 样品没有污染或修改
- 在较宽的温度范围内进行测试
- 低温保存和高温培养后,DNA回收率最高
- 在NGS样品准备和文库构建过程中没有DNA丢失
- 非常适合敏感应用与超低DNA输入
实验数据
线性DNA与不同PP聚合物的结合
试验装置
建立了10倍DNA稀释序列,包含1176 bp的线性产物(从ACTA1质粒消化,TA克隆到pGemT载体),DNA浓度为10 ng/µl、1 ng/µl、0.1 ng/µl和0.010 ng/µl。
每种DNA浓度取50µl,置于PCR板上,37℃孵育30min。然后将DNA转移到下一行PCR板上再孵育30分钟。这个过程重复7次,使DNA在8个不同的试管中培养共240分钟。所有转移步骤均使用商用的低绑定tips(康宁)。
随后使用IdT(集成DNA技术)设计的ACTA1引物和探针,对每种DNA浓度的µl进行qPCR分析,并与原始稀释序列的2µl进行比较(每次qPCR运行总DNA输入= 2 ng到0.002 ng)。
实验结果
比较三种不同PCR板:
- a)由4tit低结合PP聚合物制成的带有管的PCR板
- b)聚合酶链反应板和由聚丙烯聚合物制成的管
- c)来自竞争对手的低绑定板
图2为不同DNA浓度下的Ct值。蓝线为未在PCR管中培养的对照DNA的结果,红线为PCR管中培养的结果。δ ct用绿色表示。
对于不结合任何可检测DNA的塑料材料,红色线和蓝色线应该是相同的(δ ct = 0)(微小差异可能是移液不准确造成的)。
在最低DNA浓度为0.002 ng/µl的条件下,四度低结合材料(a)几乎呈现出理想的模式,与最佳结果的误差仅为0.44个周期。
平行测试的替代内部PP聚合物(b)显示,在最低DNA浓度下,DNA结合的δ ct高达2.57个周期。从竞争对手E (c)的“低结合”PCR板上获得了一个惊人的相似模式,δ ct高达2.92个周期。
结果清楚地显示了4度低结合PP聚合物的优越性能,表明了敏感应用的优势,如下一代测序样品制备。
在不同温度下基因组DNA与低结合PP聚合物的结合
对四自由度低结合PP聚合物进行了进一步的实验。
上述实验重复了相同实验条件使用老鼠基因组DNA(溶解在5毫米Tris-HCl pH值8.0)而不是ACTA1片段测试三种不同的孵化温度(4°C作为一个典型的存储温度反应混合物,37°C作为一个典型的温度对酶反应,和65°C的典型温度酶变性)。使用KAPA SYBR Fast qPCR Master Mix在相同DNA浓度下进行qPCR比较。
图3显示了在4°C孵育下的典型标准曲线,显示了孵育样品与对照样品在4种不同输入浓度下的Ct值。其他温度下的结果也具有可比性。
表1显示了所有不同实验条件下的Ct值-确认样品在8个不同的试管中培养共240分钟和没有经过PCR塑料表面的对照几乎没有差异。
Ct值 | Ct SD | ΔCt | |
孵育温度:4℃ | |||
20 ng / rxn | 没有孵化19.97 | 没有孵化0.01 | -0.2 |
孵化后19.77 | 孵化后0.01 | ||
2 ng / rxn | 没有孵化22.93 | 没有孵化0.08 | -0.06 |
孵化后22.87 | 孵化后0.05 | ||
0.2 ng / rxn | 没有孵化26.44 | 没有孵化0.03 | -0.06 |
孵化后26.38 | 孵化后0.05 | ||
0.02 ng / rxn | 没有孵化29.61 | 没有孵化0.14 | 0.25 |
孵化后29.86 | 孵化后0.10 | ||
培养温度:37℃ | |||
20 ng / rxn | 没有孵化19.85 | 没有孵化0.02 | -0.21 |
孵化后19.64 | 孵化后0.05 | ||
2 ng / rxn | 没有孵化22.93 | 没有孵化0.06 | -0.16 |
孵化后22.77 | 孵化后0.05 | ||
0.2 ng / rxn | 没有孵化26.28 | 没有孵化0.03 | 0.10 |
孵化后26.37 | 孵化后0.05 | ||
0.02 ng / rxn | 没有孵化29.49 | 没有孵化0.45 | 0.08 |
孵化后29.57 | 孵化后0.36 | ||
培养温度:65°C | |||
20 ng / rxn | 没有孵化18.51 | 没有孵化0.04 | -0.73 |
孵化后17.78 | 孵化后0.01 | ||
2 ng / rxn | 没有孵化21.41 | 没有孵化0.003 | -0.16 |
孵化后21.26 | 孵化后0.02 | ||
0.2 ng / rxn | 没有孵化24.69 | 没有孵化0.13 | -0.18 |
孵化后24.51 | 孵化后0.03 | ||
0.02 ng / rxn | 没有孵化28.57 | 没有孵化0.23 | -0.42 |
孵化后28.15 | 孵化后0.56 |
表1:基因组DNA结合低结合PP聚合物在不同的温度- Ct值为所有不同的实验条件
实验数据:DNA在不同温度下粘附的比较数据由我们的日本合作伙伴Nippon Genetics提供。
以下的低绑定板可订购现货,但额外的超低绑定性能的产品可根据要求提供。阅读少▲